Советуем и решаем вопросы.

Иногда в эксперименте встречается низкая активность сыворотки и определить ИСБ на мишени не удается. В этом случае СБИ131 определяют в 1 мл сыворотки. В пробирку с сывороткой добавляют 10 мл 10%-ной ТХУК, осадок хорошо перемешивают и центрифугируют. Центрифугат сливают и экстракцию неорганического йода раствором ТХУК повторяют еще один раз. Объединенный экстракт используют для определения активности неорганического йода.

Сумму активности неорганического йода и ИСБ принимают за 100% и соответственно определяют процентное соотношение ИСБ и неорганического I131 в 1 мл сыворотки.

Белки удаляют фильтрованием; полученный осадок (№ 1) промывают бутанолом и сушат на воздухе. Фильтрат немедленно подщелачивают 7,5 н. и упаривают до 3-5 мл в вакууме при 1 45-60° на водяной бане. Сгущенный бутаноловый экстракт фильтруют. Соли и нерастворимые в сухом бутаноле вещества удаляются при фильтровании (осадок № 2). Осадок промывают бутанолом. Бутаноловый раствор концентрируют в вакууме до 0,5 мл, добавляют 1 мл бутанола и 3 мл хлороформа; если раствор мутный, его фильтруют, а фильтр промывают смесью бутанол-хлороформа (1:3) (осадок № 3). Из полученного бутанол-хлороформенного раствора йодированные компоненты экстрагируют встряхиванием с 20, 15 и 10 мл 1 н.. Эмульсию разделяют центрифугированием. Аммиачно-бутаноловые слои собирают вместе и упаривают досуха в вакууме при 1 45-60°. Сухой остаток аммиачного экстракта растворяют в 1 мл смеси метанол-конц. аммиак (99:1), переносят в тигель, сушат при г 40°, растворяют в 50 мкл бутанола и наносят на хромато-грамму, предварительно взяв 5 мкл экстракта для подсчета активности. Высушенные осадки № 1 и 2 взвешивают, берут навески по 10 мг, определяют активность в навеске и во всем осадке.

В хлороформенном слое определяют активность в 0,1 мл и пересчитывают на весь объем.

Зная общую активность осадков № 1 и 2, хлороформенного раствора и аммиачного экстракта, определяют процентное соотношение между ними, принимая сумму всех активностей за 100%. Осадок № 1 содержит йодопротеины, № 2 — неорганические соли, хлороформенный раствор липиды и аммиачный экстракт — аминокислоты.

Хроматографическое разделение йодированных компонентов сыворотки и получение автографов производят так же, как при анализе йодированных компонентов щитовидной железы.