Советуем и решаем вопросы.

Для определения «глюкокортикоидной» активности различных кортикостероидов разработан специфический и хорошо воспроизводимый тест на взрослых адреналэктомированных крысах, но для такого испытания нужно вводить довольно большое количество препарата и потому этот тест мало пригоден для определения глюкокортикоидов в экстрактах из мочи и другого биологического материала. Адреналэктомированные мыши и инфантильные крысы значительно более чувствительны к действию глюкокортикоидов. Далее описывается методика исследования на инфантильных крысах.

Трехнедельных крысят весом около 50 г в течение 2 дней содержат для адаптации в лаборатории и дают им стандартный корм и воду неограниченно.

После операции до следующего утра вместо питьевой воды им дают 5%-ный раствор глюкозы в 0,9% -ной №С1, а затем только 0,9 ЫаС1. Корм все время дается в изобилии до вечера второго послеоперационного дня. Вечером корм отбирают, а утром следующего дня (т. е. с третьего дня после операции) отнимают солевой раствор и вводят животным подкожно испытуемый препарат или 0,5- 1,0 мг гидрокортизона и помещают их в отдельные клетки или стеклянные 1,5-литровые банки со слоем опилок на дне. Необходимо с этого времени содержать животных изолированно, так как у некоторых особей контрольной группы или у животных, получивших неактивный препарат, наступает гипогликемия, возникают судороги и при совместном содержании такие крысы могут нападать на соседей.

Испытуемый препарат в 0,1 мл растительного масла вводят подкожно. Кортикостероиды сначала растворяют в ацетоне, а затем смешивают с маслом так, чтобы нужная доза содержалась в 0,1 мл его объема и выпаривают ацетон под вакуумом.

Через 6 час после инъекции животных взвешивают, декапитируют, очень быстро, чтобы избежать расщепления гликогена, извлекают печень и помещают ее в чашку Петри на лед. Пробирки помещают в кипящую водяную баню на 30 мин (за это время их несколько раз встряхивают). Через 30 мин пробирки вынимают из водяной бани и охлаждают их водопроводной водой. Затем добавляют 2 капли 10%-ного 2п504 и 4 мл 96-градусного спирта. Смесь встряхивают и слегка подогревают в кипящей водяной бане для осаждения гликогена (до начала кипения спирта).

После этого гидролизуют гликоген до глюкозы. Для этого к каждой пробирке добавляют по 2 мл 2,5 КН2504 и ставят их в кипящую баню на 30 мин. После гидролиза пробирки охлаждают и в каждую из них добавляют по 1 капле раствора фенолфталеина, а затем по каплям нейтрализуют содержание пробирок 2,5 н до первого появления розового окрашивания.