Влияние инсулина и адреналина на содержание сахара в крови. Методика Нельсон-Шомодьи

В последние годы для определения сахара в крови используют методику Нельсон — Шомодьи, обладающую большей специфичностью для выявления глюкозы.
Принцип метода. В сыворотке крови или в фильтрате ткани, освобожденных от белков, глюкоза окисляется меднотартроновым реактивом. При этом медь из окисной формы переходит в закисную, восстанавливая молибден арсенмолибдата аммония и образуя молибденовую синь, количество которой определяется колориметрически.

Для окисления глюкозы берут 1 мл безбелкового фильтрата и смешивают с 1 мл меднотартронового реактива. Смесь нагревают в кипящей водяной бане в течение 20 мин (часто взбалтывая).

После нагревания и 10-минутного охлаждения к смеси добавляют 1 мл арсенмолибдатного реактива, при этом образуется молибденовая синь. Развитие окраски заканчивается через 15- 20 мин (к этому времени прекращается выделение пузырьков углекислого газа). Объем смеси доводят водой до 6 или 25 мл, после чего проводят фотометрирование. Одновременно определяют количество редуцирующих примесей в контрольной пробе с используемыми реактивами. Фотометрируют при длине волны 500-520 ммк. Количество глюкозы в фотометрированной пробе определяют по стандартной кривой, построенной на основании значений экстинций, полученных для различных количеств 10 мг% раствора глюкозы.
Мыши при обычных комнатных температурных условиях хорошо переносят инсулин, но при повышенной температуре реагируют на сравнительно небольшую его дозу появления судорог.

Процент реагирующих особей закономерно увеличивается с увеличением дозы введенного инсулина: в определенной зоне доз между логарифмом дозы и процентом реагирующих животных наблюдается почти прямолинейная зависимость.
Эта зависимость используется для количественной оценки активности препаратов инсулина. В большинстве случаев эти исследования проводят так, что одновременно на четырех достаточно больших группах мышей сравнивают действие двух доз испытуемого препарата с действием двух доз инсулина известной активности.
Испытания проводят на взрослых мышах, самцах весом в 16-20 г. Для каждого испытания необходимо иметь 4 группы, по 22-25 особей в каждой.
После 16-17-часового периода голодания группы мышей, отобранных для опыта, помещают в высоких стеклянных химических стаканах по 4-5 особей в каждом, в термостат с необходимой для наблюдений стеклянной передней стенкой при т. 36-38е. После 15-20 мин пребывания в термостате мышам вводят инсулин.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *