Суммарная гонадотропная реакция. Образование желтых тел
Исследование проводят на инфантильных самках мышей, весом в 6-8 г (возраст 3-4 недели). Более молодые мыши часто погибают, мышей же весом свыше 8 г не следует брать в опыт, так как они слишком близки к возрасту естественного полового созревания. При испытании препаратов нужно использовать не менее 3 мышей на дозу, считаясь с возможностью индивидуальной изменчивости. Испытание мочи с целью диагностики беременности проводится обычно на 5 животных. Условия введения препаратов такие же, какие указаны для крыс.
Вскрывают мышей по истечении 4 суток (96-100 час) с момента 1-й инъекции, т. е. на пятый день, считая день начала опыта первым. На 3, 4 и 5-й день (непосредственно перед забоем) осматривается влагалище и, если оно открыто, берутся влагалищные мазки. Умерщвляют животных эфиром или хлороформом. Можно также быстро отрезать ножницами голову и спустить кровь, держа обезглавленное животное за хвост.
При вскрытии определяют степень увеличения и наполнения секретом матки и, главное, состояние яичников (увеличены ли они, имеются ли крупные фолликулы, геморрагические фолликулы, желтые тела). В случае сомнений рекомендуется вырезать яичник, захватив пинцетом верхний край рога матки. Яичник промывается водой (водопроводной), затем помещают его на предметное стекло в несколько капель глицерина. Спустя 5-10 мин овариальная ткань полностью бледнеет, в то время как геморрагические фолликулы («блют- а пункты») выступают в виде отграниченных, красновато-черных образований.
Для микроскопического осмотра яичник осторожно покрывают большим покровным стеклом. При максимально открытой диафрагме микроскопа «кровяная точка» узнается как темно-красное, резко очерченное пятно в то время как фолликулы выступают неясно. В яичнике видны также сосуды и кровоизлияния из сосудов, которые не следует смешивать с геморрагическими фолликулами.
Для лучшего распознавания желтых тел Цондек и Краус рекомендуют раздавить яичники на стекле. Промытый в воде яичник помещают на предметное стекло в несколько капель глицерина и-покрывают вторым предметным стеклом. Стекла сдавливают и концы их скрепляются резиновыми кольцами, чтобы стекла плотно прилегали одно к другому. Рекомендуется выждать 10-15 мин. За это время фолликулы и яйцеклетки так бледнеют, что превращаются в светлые, отчетливо ограниченные поверхности, а массивные желтые тела и лютеинизированные фолликулы выступают как резко-ограниченные темно-серые поверхности, внутри которых можно-различать множество лютеиновых клеток. При рассматривании раздавленного препарата диафрагма микроскопа должна быть полностью закрыта.
Гонадотропную реакцию у мышей, так же как и у крыс, можно учитывать по изменению веса яичников и матки, которые следует-взвешивать изолированно. Взвешивание производится на торзионных весах.
Для приготовления гистологических препаратов, материал непосредственно после вскрытия (или взвешивания) должен быть зафиксирован.
Добавить комментарий