Советуем и решаем вопросы.

Каждый кусок (весом 80-200 мг) отдельно сразу помещают в предварительно взвешенные 10-миллилитровые сосудики с резиновыми пробками, содержащие по 2 мл инкубационной среды (в основном — плазмы или же бикарбонатного буферного раствора Кребса, к которому добавлены желатин (200 мг/100 мл) и меченая глюкоза.

При приготовлении инкубационной смеси к 1,9 мл буфера (или плазмы) добавляют 0,1 мл соответствующего раствора глюкозы, содержащего 0,2 мккюри глюкозы С14. Резиновые пробки должны иметь 2 отверстия с вставленными в них стеклянными трубочками, также закрытыми резиновыми колпачками или пробочками. В каждом сосудике под одной из этих трубок должна быть подвешена маленькая пластмассовая чашечка.

Для определения веса ткани сосудики снова взвешивают и через тонкие иглы, вколотые в маленькие пробочки, пропускают в течение 5 мин газовую смесь (95% 02 + 5% С02); иглы вынимают и герметически закрытые сосудики инкубируют 2 час в водяной бане (37,6°) при непрерывном качании (72 раза в минуту).
Так же используют жир от другого придатка семенника. После инкубации, используя туберкулиновый шприц с тонкой иглой, через прокол в соответствующей пробочке в подвешенную в сосудике чашечку вводят 0,2 мл свежеприготовленного раствора NaOH. Для этого насыщенный раствор NaOH разбавляют водой, свободной от С02 в отношении 1 : 10. К инкубационной среде добавляют 0 2 мл 10 N H2S04.
По меньшей мере через 2 час содержимое подвешенной чашечки количественно переносят во взвешенную центрифужную пробирку, содержащую раствор ВаС12. Осажденный ВаС03 3 раза промывают свободной от С02 водой, высушивают и для определения его количества (обычно 8-17 мг) снова взвешивают пробирку.

Для определения удельной радиоактивности образовавшегося углекислого бария часто его переносят во взвешенную мишень, измеряют радиоактивность и результат выражают как число импульсов в минуту на общее количество СОг (как ВаС03) на 100 г жировой ткани.
При втором способе, в котором учитывают поглощение глюкозы, эта методика позволяет обнаружить 10 мк ед/мл инсулина. У человека в плазме крови, взятой натощак, этой методикой обнаружено от 50 до 350 мк ед/мл инсулина.
При втором способе, в котором учитывают поглощение глюкозы, берут только 0,3 мл буфера или плазмы; концентрацию глюкозы доводят до 200 мг на 100 мл; инкубируют 4 час.
Одновременно ставят контрольный опыт с сосудиками, содержащими те же растворы, но без добавления ткани.
После инкубации берут по 0,5 мл раствора для двух параллельных определений глюкозы.
Результаты выражают в количестве микромолей глюкозы, «поглощаемой» 1 г жировой ткани.

Надо, однако, отметить, что в зависимости от реактивности животных и дозы аллоксана им повреждается не только островковый аппарат поджелудочной железы; в первые дни после его введения наблюдается ряд нарушений, которые не удается устранить введением инсулина и которые могут привести к гибели животных. С. М. Лейтес справедливо указывает на грубую ошибку, которую делают многие исследователи, относящие все изменения, наступающие вскоре после введения аллоксана только за счет недостатка инсулина. Следует иметь в виду, что изменения функции печени, почек и, возможно, других органов весьма осложняют картину сахарного диабета. Однако, если животные продолжают жить, эти «побочные» эффекты обычно за 10-15 дней проходят и с этого времени можно говорить об инсулиновой недостаточности в относительно неосложненной ее форме.