Радиоактивность ткани щитовидной железы.
После подсчета общей активности бумажную мишень с нанесенной тканью железы помещают в пробирку и заливают 2-3 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Периодически встряхивая пробирку, переводят свободные йодиды и йодаминокислоты в раствор. Через 15 мин раствор сливают, наливают свежую порцию кислоты и повторяют экстракцию. Высушив мишень, производят подсчет активности и высчитывают процент ИСБ по отношению к общей активности препарата.
Щитовидную железу животного измельчают до состояния и гидролизуют трипсином в 0,15 М фосфатном буфере (рН-8,4) 18-20 час при температуре 37° (на 100 мг железы 5 мл буферного раствора и 2-3 мг трипсина). После инкубации в пробирку с гидролизатом добавляют 2-3 мл н. бутанола, насыщенного 2 н. НС1, встряхивают в течение 2-3 мин и центрифугируют для разделения жидкостей. Слой бутанола (верхний) отсасывают пипеткой и переносят в тигель. Экстракцию повторяют дважды и к объединенному бутаноловому экстракту тотчас добавляют ЫН.,ОН до отчетливой щелочной реакции. Тигель помещают в термостат и сушат при 1 50-60°. Сухой экстракт растворяют в 0,1 мл сухого бутанола и подвергают хроматографии.
На хроматографическую бумагу наносят количество экстракта, способное дать не менее 3-5 тыс. импульсов (3-излучение). Расчет производится после предварительного определения активности; в 5 мкл готового для хроматографии экстракта.
Животным подкожно вводят радиоактивный иод (I131). Доза для кроликов весом 2 кг- 50-100 мккюри I131, для крыс весом 200 г-15-20 мккюри. Кровь берут не раньше, чем через сутки после введения радиоиода. Для определения активности достаточно 0,2 мл сыворотки. На круглую бумажную мишень диаметром соответственно размеру окна торцового счетчика, наколотую на иголку, микропипеткой наносят 0,02-0,05 мл сыворотки. Мишени подсушивают в термостате при 1 50-60° и определяют активность р-излучения. Из нескольких параллельных проб выводят среднюю активность и пересчитывают на 1 мл сыворотки.
После подсчета общей активности бумажную мишень с сывороткой помещают в пробирку и заливают 2-3 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУК). В течение двух часов пробирку периодически встряхивают, затем сливают раствор, а мишень с нанесенной на нее сывороткой дважды вновь экстрагируют 10%-ной ТХУК по 30 мин. После экстракции на мишени остается активность связанного с белком йода, а неорганический йод переходит в раствор. Подсушив мишень, определяют активность нанесенной на нее сыворотки. По разнице между первым и вторым подсчетом находят активность неорганического йода и выражают ее в процентах.
Добавить комментарий