Согласно терминологии, предложенной Хилом, весь цикл условно разбивается на следующие стадии: 1) Dioestrus — стадия покоя; 2) Prooestrus — стадия подготовки к течке (предтечка); 3) Oestrus — течка (Лонг и Эванс подразделяют эту стадию на две); 4) Metaoestrus — «послетечка», последующие за течкой изменения и возвращение к исходному состоянию.
Соответственно изменяется состав влагалищного содержимого.
Методика исследования. Мазки из влагалища можно брать разными способами. Мы предпочитаем в коротких опытах пользоваться палочками (спичками) с тонкозаостренным концом, на который намотано небольшое количество ваты.
При обвертывании заостренного кончика палочки ватой делают это осторожно, чтобы часть ватного тампона (на самом конце), которая будет введена во влагалище, не соприкасалась с пальцами, так как клетки эпидермиса кожи пальцев, попав в мазок, могут нарушить микроскопическую картину.
Следует заранее заготовить достаточное количество палочек с ватой по числу исследуемых крыс. Каждую палочку можно использовать только один раз. На рабочем столе должны быть приготовлены кристаллизатор с водой (можно водопроводной), нужное количество чистых предметных стекол и восковой карандаш или тушь и перо для надписывания на стеклах номеров.
Перед взятием мазка обвернутый ватой конец палочки погружается в чашечку с водой, и капля воды переносится на предметное стекло. После этого обвернутый ватой конец палочки осторожно вводят во влагалище самки и слегка там поворачивают. Вынув его из влагалища, размазывают захваченную ватой пробу в капле воды, нанесенной на предметное стекло, и на стекле надписывают номер животного и дату взятия мазка.
В научных исследованиях, особенно при систематическом взятии мазков у одних и тех же животных, предпочитают, во избежание механического раздражения стенки влагалища, брать пробы пипеткой. В обыкновенную глазную пипетку набирают несколько капель воды и, неглубоко вводя кончик пипетки во влагалище, промывают последнее 1-2 раза, выжимая воду из пипетки и насасывая ее обратно. Взятая таким образом проба переносится на предметное стекло.
Каплю со взятой пробой лучше всего рассматривать под микроскопом немедленно, в слегка затемненном поле. Наличие слизи часто уже в момент взятия мазка видно простым глазом. При некотором навыке распознавание клеточного состава мазка на неокрашенном препарате (в приготовленной указанным способом капле, без покровного стекла) удается безошибочно, при малом увеличении микроскопа. По мере подсыхания капли изучение мазка делается все более затруднительным. Считается, что более точно мазок распознается на фиксированном и окрашенном препарате. Приготовление последнего, безусловно, необходимо в тех случаях, когда мазок желательно сохранить. На одно предметное стекло можно нанести несколько мазков, надписав над каждым из них номер животного.
Фиксация и окраска мазков производятся следующим образом: в течение примерно суток предметные стекла с нанесенными каплями высушиваются на воздухе (беречь от пыли!). Затем каждое предметное стекло в отдельности медленно проводится над пламенем газовой горелки, чем достигается фиксация мазка. На высушенный мазок наносится пипеткой несколько капель раствора краски. Хорошие результаты получаются с метиленовой синькой, которую можно приготовить про запас в виде насыщенного раствора. Перед употреблением готовится небольшое количество разбавленного раствора (из расчета 5 капель насыщенного раствора на 1 см3 воды).
Окрашивание мазков продолжается 15-20 мин. После этого краску смазывают с мазков слабой струей воды и, обтерев предметные стекла кругом мазков, дают им подсохнуть на воздухе 2-3 час.