Раствор фильтруют через складчатый фильтр, пробирку, фильтр промывают 10 мл дестиллированной воды и после добавления к фильтрату 80 мл двунормального раствора соляной кислоты и 40 мл ледяной уксусной кислоты доводят объем реактива до 200 мл.
2-й реактив: 0,1 г азотнокислого натра растворяют в 100 мл дестиллированной воды, раствор готовят 1 раз в дне недели.
Не все ткани и жидкости глаза обрабатывают одинаково. Водянистая влага никакой обработки не требует. Поэтому после энуклеации глаза кролика влагу передней камеры отсасывают однограммовым шприцем в количестве 0,1 мл и переносят в мерный цилиндр на 10 мл и последовательно разводят дестиллированной водой до 5 мл. Затем в цилиндр прибавляют 5 мл реактива № 1 и 0,1 мл реактива № 2. Содержимое смешивают и через 30 минут полученную розоватую окраску сравнивают с окраской стандартного раствора в колориметре Дюбоска.
Кровь и стекловидное тело требуют некоторой предварительной обработки, которая в основном сводится к следующему: 0,2 мл крови или стекловидного тела отмеривают пипеткой емкостью в 0,2 мл и содержимое выдувают в пробирку с метками на 5 и 10 мл. В пробирку заранее наливают 2 мл воды. Пипетку 2 раза споласкивают водой, причем промывную воду вливают в ту же пробирку. Затем в пробирку прибавляют 1 мл децинормального раствора едкого натрия, встряхивают ее, через 2 минуты после наступления гемолиза добавляют 5 мл 0,45% раствора сернокислого цинка и помещают на 5 минут в водяную баню, затем переносят пробирку в стакан с холодной водой и доводят объем жидкости до 10 мл.. После взбалтывания содержимое пробирки фильтруют через складчатый фильтр в 10-граммовый мерный цилиндр до метки 5 мл, что эквивалентно 0,1 мл крови или стекловидного тела. В цилиндр добавляют 5 мл реактива № 1 и 0,1 мл реактива № 2, содержимое смешивают и через 30 минут окраску сравнивают в колориметре.
Определение сульфидина в тканях проводят так: 0,2 г ткани отвешивают на торзионных весах и немедленно в: небольшой фарфоровой ступке растирают с 0,5 г толченого стекла (предварительно прокипяченного и просушенного) до образования однообразной массы. Затем кашицу шпателем переносят в пробирку, ступку и пестик дважды споласкивают 3-3,5 мл воды, а затем еще раз 5 мл 0,45% раствора сернокислого цинка. После этого добавляют 1 мл децинормального раствора NaOH и помещают пробирку в водяную баню на 5 минут. После охлаждения вес содержимого пробирки доводят до 10,5 г (вес пробирки должен быть определен заранее). Жидкость фильтруют в мерный цилиндр или пробирку с меткой 5 мл я с 5 мл этой жидкости производят всю последующую процедуру определения сульфидина.
В процессе работы нам пришлось кое в чем отступить от указанной выше методики, но эти изменения касались, главным образом, технической стороны анализа. При разделении глаза на отдельные ткани выяснилось, что роговица среднего кролика весит меньше 0,1 г. По методике проф. Л. И. Лапина, необходимо брать для анализа 0,2 г ткани, поэтому берут всю роговицу, взвешивают ее на торзионных весах и соответствующим образом обрабатывают, а в Дальнейшем при вычислении содержания сульфидина делают соответствующий перерасчет. Так пришлось поступить и с другими тканями, количество которых было меньше 0,2 г. Кроме того, нами было замечено, что разделенные ткани в пробирках быстро высыхают и с трудом извлекаются оттуда для последующей обработки. Поэтому в пробирку к разделенным тканям глаза добавляют 1 мл воды. При переносе тканей из пробирки в ступку одновременно выливают имевшуюся в них воду, что в значительной степени облегчает растирание тканей с толченым стеклом.
Глазное яблоко энуклеируют без анестезии (ретробульбарно вводится 2 мл дестиллированной воды).