Влияние инсулина и адреналина на содержание сахара в крови. Методика Хагедорна-Иенсена

Медицина и лечение

Установление и систематическая проверка титра раствора гипосульфита можно производить двумя методами: а) по 0,005 н. раствору иодноватокислого калия или б) по определенной навеске свежевозогнанного иода. Первый из этих методов очень удобен, так как иодноватокислый калий в растворе достаточно устойчив, если он хранится в закрытом сосуде, обвернутом светонепроницаемой бумагой. Для получения 200 раствора 0,3566 г безводного химически чистого КЛ03 растворяют в 1 л воды.

Освобождение от белков. 1. Готовят гидроокись цинка: в пробирки (по 2 на каждый анализ и 2 для контрольного опыта) наливают по 1 мл 0,1 н. и по 5 мл 0,45%-ного сульфата цинка (реактив 2). Образуется коллоидный осадок гидрата окиси цинка.
Делают надрез краевой вены уха кролика и, вытерев первые 1-2 капли крови, микропипеткой набирают точно 0,1 мл крови. Взятую пробу крови немедленно выдувают в пробирку с приготовленной гидроокисью цинка; погрузив пипетку глубже в жидкость, дважды промывают пипетку, насасывая жидкость и выдувая ее «обратно в пробирку.
Для параллельного опыта берут отдельной микропипеткой вторую пробу крови от того же животного; кровь (0,1 мл) выдувают в другую пробирку и, как раньше, дважды промывают пипетку.

На обеих пробирках сверху восковым карандашом надписывают один и тот же номер. Пробирки устанавливают в специальном штативе, который затем помещают в водяную баню. Две другие пробирки с гидроокисью цинка нумеруют специальным номером и, добавляя туда крови, также устанавливают в штатив для проведения всех дальнейших реакций (контрольный опыт).

К следующей процедуре можно приступить немедленно; можно, однако, и не торопиться, так как на этой стадии пробирки могут быть на некоторое время (до 6 час) оставлены без изменения результатов. Это дает возможность, если в опыте несколько животных, собрать остальные пробы установив все пробирки в общий штатив, всю серию анализов продолжать одновременно. Также возможно при проведении опытов (например, с инсулином или адреналином) объединить все, берущиеся на протяжении нескольких часов, пробы крови и проводить их анализ одновременно. Для учебного практикума мы это не рекомендуем.

После стадии 5, т. е. после освобождения от белков, анализ проб может быть приостановлен даже на несколько суток, а после стадии 6 (прибавления красной кровяной соли)-в течение 1 час с сохранением проб при комнатной температуре, без влияния на конечный результат.
Штатив с пробирками помещают в кипящую воду на 3 мин. Белки выпадают в виде сероватых сгустков и жидкость делается прозрачной.
В маленькие стеклянные воронки закладывают по кусочку предварительно вымытой и высушенной ваты. При приготовлении ватного фильтра вату следует закладывать рыхло, а не тугим тампоном.

Вату в вороночках смачивают дистиллированной водой и, не приминая вату, предоставляют воде стечь. Воронки устанавливают по одной в колбочки Эрленмейера (или стаканчики). Число колбочек с фильтрами — по числу кробирок. На колбочках надписывают те же номера, что и на пробирках, и остывшую за это время жидкость из каждой пробирки фильтруют в отдельную колбочку с соответствующим номером.
После того как жидкость профильтруется, нужно пробирку и фильтр промыть. Делают это два раза, наливая в пробирку каждый раз по 3 мл дистиллированной воды и сливая воду в фильтр.

Оцените статью
Новостной портал
Добавить комментарий