Советуем и решаем вопросы.

В яичниках определяют концентрацию аскорбиновой кислоты по видоизмененной методике Миндлин и Бутлер.

Степень снижения концентрации аскорбиновой кислоты в яичниках подопытных крыс по сравнению с контрольными, получавшими вместо ЛГ физиологический раствор, служит показателем лютеинизирующей активности препарата. В определенных интервалах между логарифмом дозы и степенью снижения концентрации аскорбиновой кислоты имеется линейная зависимость.

Ввиду того что концентрация аскорбиновой кислоты в яичниках колеблется в зависимости от линии крыс, индивидуальной изменчивости, времени года и суток, для количественного выражения результатов опыты надо проводить на линейных животных (не менее 5 особей на одну дозу) и обязательно параллельно со стандартом ЛГ. Этот метод достаточно специфичен, так как другие гипофизарные гормоны, и в том числе ФСГ, не влияют на содержание аскорбиновой кислоты в яичниках.

Яичники гомогенизируют сначала в 0,5 мл 2,5%-ного раствора метафосфорной кислоты, после чего добавляют еще 9,5 мл раствора метафосфорной кислоты. Через 30-60 мин экстракт центрифугируют (или фильтруют). В колбочку, содержащую 7 мл 4,53%-ного раствора ацетата натрия (рН раствора доводят до 7 0,5 М раствором уксусной кислоты) и 1,0 мл 0,03%-ного раствора 2,6 дихлорфенолиндофенола, приготовленного на фосфатном буфере при рН 7,0. Непосредственно перед колориметрированием добавляют 8,0 мл фильтрата. При этом развивается розовое окрашивание, меняющее свой цвет уже через 30 сек. Колориметрируют на фотоэлектроколориметре при 520 (зеленый светофильтр) против дистиллированной воды. Содержание аскорбиновой кислоты в каждом яичнике выражают в мкг на 100 г веса яичника. Периодически надо делать калибровочную кривую. Ее делают, как описано выше, но в колбу вместо фильтрата яичника добавляют разные разведения аскорбиновой кислоты.

Этот метод основан на высокой чувствительности вентрального отдела простаты к ЛГ. Инфантильным (21 день) гипофизэктомированным самцам крыс через 2 дня после операции в течение 4 дней вводят внутрибрюшинно по 1 разу в день испытуемый препарат или экстракт гипофиза. Через 24 час после последней инъекции производится вскрытие животных. За условную единицу активности ЛГ принимается такое количество препарата, которое увеличивает вес вентрального отдела простаты на 100% по сравнению с контрольными крысами, которые не получали инъекций ЛГ. Примесь ФСГ не влияет на результаты.