Советуем и решаем вопросы.

У животных после вскрытия брюшной полости осторожно извлекают яичники вместе с яйцеводами и кусочком матки и переносят на предметное стекло, смачивают физиологическим раствором. Под бинокуляром (при увеличении в 8 раз) глазными скальпелями освобождают яичники и яйцевод от сопутствующих тканей и осторожно расправляют яйцевод.

В случае положительной реакции в верхней трети обоих яйцеводов видно по просвечивающему утолщенному участку место скопления яйцеклеток. После некоторого навыка эти участки легко различаются и их присутствие можно считать показателем реакции.

Для количественного учета реакции подсчитывают число яйцеклеток (при Х40); для этого осторожно прокалывают стенку просвечивающего участка и легким нажимом иглы или скальпеля выдавливают содержимое яйцеводов, представляющее собой скопление яйцеклеток с сопутствующими фолликулярными клетками. Если вскрытие производить в указанные сроки, то при достаточно сильной реакции масса овулировавших яйцеклеток образует единый комок, несколько напоминающий по внешнему виду лягушечью икру.

Для подсчета яйцеклеток их освобождают от сопутствующих клеток с помощью препаровальных игол; можно также применить фермент гиалуронидазу (или ферменты, расщепляющие белки, типа пепсина); для лучшего различия яйцеклеток можно на первых порах подкрашивать их раствором нейтральным красным в разведении 1 : 5000.

При положительной реакции в яйцеводах может быть обнаружено до 50 и более яйцеклеток, причем имеется прямая зависимость между степенью реакции и дозой.

При обработке результатов можно подсчитать число овулировавших самок и среднее количество яйцеклеток, причем установлена довольно четкая зависимость между дозой и эффектом, особенно по второму показателю.

Таким образом, проведя серию опытов с различными дозами стандартного препарата в условиях данной лаборатории, можно сравнивать испытуемый препарат со стандартом и выразить его активность в общепринятых единицах.

При полуколичественном определении (например, при индивидуальном исследовании гипофизов мелких животных) степень реакции можно грубо оценивать по следующей условной шкале:

слабая реакция — в яйцеводах реципиентов обнаруживают по 1-10 яйцеклеток, средняя — И -19 и сильная — более 20 яйцеклеток.

За последние годы широкое распространение получил метод определения активности Л Г, предложенный Пэрлоу (1961) и затем подвергшийся некоторым незначительным модификациям, основанный на способности ЛГ снижать концентрацию аскорбиновой кислоты в лютеинизированных яичниках инфантильных крыс. Исследования подразделяется на 2 стадии: 1) предварительная подготовка животных и 2) биологическое испытание.