Советуем и решаем вопросы.

Тиреоидин прибавляется в определенном количестве непосредственно к воде, к которой для подщелачивания добавляется щепотка соды. О «концентрации» тиреоидина можно говорить лишь условно, так как на самом деле получается не раствор, а лишь более или менее густая взвесь тиреоидина в воде. При более точной работе лучше приготовить тщательно размешанную более концентрированную суспензию, которая затем в определенном объеме добавляется к воде (тщательно перемешать). Само собой разумеется что в банку с контрольными головастиками также добавляется соответствующее количество соды.

Тироксин растворяется в 0,002 н. растворе ГфН. Соответственным образом подщелочена должна быть и вода с контрольными головастиками.

При количественном учете реакции удобны для измерения следующие признаки: 1) длина туловища от кончика головы до анального отверстия; 2) длина хвоста от кончика до анального отверстия (иногда используют в качестве критерия реакции изменение общей длины головастика); 3) длина кишечника от пилорнческой части желудка до анального отверстия; для промера кишечник освобождают от брыжейки и укладывают на стеклянной пластинке по прямой линии. Под стекло прокладывают миллиметровую бумагу и выражают длину кишечника в миллиметрах.

Кроме того, очень демонстративны и некоторые качественные изменения в процессе метаморфоза: 4) отпадение роговых челюстей; 5) прорезывание передних ног.

Прорезывание передних ног отмечается еще во время опыта. Также прижизненно можно вести учет изменения общей длины тела, связанной главным образом с резорбцией хвоста. Головастиков, находящихся в спокойном состоянии на дне кристаллизатора с водой, можно измерять с точностью до полумиллиметра, под кристаллизатор миллиметровую бумагу или линеечку. Остальные признаки учитываются к концу опыта. Наиболее чувствительным из них является длина кишечника, и этот признак следует учитывать обязательно.

Стимуляция метаморфоза головастиков имплантацией щитовидной железы. Простота техники имплантации и очень небольшое количество ткани щитовидной железы, нужное для реакции, определяют большую доступность методики для учебных опытов. Данная методика часто применяется и при различных исследованиях, так как особая ценность ее заключается в том, что благодаря большой чувствительности реакции она позволяет количественно определять содержание гормона в небольшой пробе ткани, например в отдельных щитовидных железах даже мелких животных (крысы, кролика, курицы, голубя. B различных тканях и т. д. Эта методика для подобных же целей была предложена Б. М. Завадовским на аксолотлях. Однако головастики являются более чувствительным тест-объектом. Таким образом (на головастиках и аксолотлях) , возможно исследование биологической активности щитовидной железы различных видов , животных, щитовидной железы эмбрионов, половых различий в активности щитовидной железы, и ее изменений в связи с возрастом и различными физиологическими или патологическими состояниями, изучение судьбы гормона в организме и т. д. Применение детально разработанных Л. Я. Бляхером количественных форм учета реакции максимально уточняет тест на головастиках.

Для опытов берут головастиков одного вида и из одного водоема, не начавших еще метаморфозировать (не старше 1-й и 2-й стадии по номенклатуре Л. Я. Бляхера). Учебные опыты можно ставить на 5-10 экземплярах, взяв такое же количество для контроля, но в точных исследованиях в каждой группе желательно иметь не менее 25-30 особей, одинаковых по размеру. Так как за время исследования головастики продолжают развиваться и могут начать метаморфозировать, в каждый опыт обязательно включение контрольной группы из такого же числа особей.

Вынутый из воды головастик обвертывается влажной марлей так, чтобы он не мог производить движений. С правой стороны брюшка, ближе к xboctv, глазным скальпелем делается очень небольшой разрез и через него тонким пинцетом вводится в брюшную полость имплантируемый кусочек. Для того чтобы кусочек не выпадал обратно, рекомендуется протолкнуть его дальше от разреза назад и в бок.

Оперированных головастиков помещают в свежую воду (комнатной температуры) и содержат в таких же условиях, как и контрольных. Продолжительность опыта — 4 дня для головастиков К. temporaria и несколько больше для других, менее чувствительных видов (например, 7 дней для R. ridibunda).

К концу опыта производят промеры длины тела (или в отдельности туловища и хвоста), длины кишечника и учета других, используемых б качестве критерия признаков.

Величина имплантата 1 мг (по указанию А. А. Войткевича), с вариациями от 0,5 до 1,5 мг или 1-3 мг (по указанию Н. М. Артемова). Очищенную от окружающих тканей свежую щитовидную железу (или другую исследуемую ткань) быстро взвешивают и разрезают в физиологическом растворе на соответствующее количество по возможности одинаковых кусочков. Вес отдельных кусочков будет неизбежно варьировать, однако вызванные этим отклонения в скорости метаморфоза нивелируются значительным количеством подопытного материала. Каждый кусочек имплантируют отдельному головастику, при учете же реакций подсчитывают средние показатели группы с соответствующими поправками, вычисляемыми обычными биометрическими методами.